一、细胞状态精准控制
1.细胞活性与密度管理
使用前需确保细胞存活率>95%且处于对数生长期。转染时细胞密度严格控制在2.0×106 cells/mL（±10%），密度过低导致转染效率下降，过高则引发营养竞争。
2.培养基选择规范
复合物制备必须使用无血清高糖DMEM，避免血清蛋白干扰转染效率。对于自行开发的悬浮培养基，需预先验证与试剂的兼容性。
二、试剂使用参数优化
1.DNA和PolyTool™ VIS转染试剂配比体系
建议按照1:3的质粒DNA（μg）与PolyTool™ VIS转染试剂（μL）比例（如200 μg DNA配600 μL PolyTool™ VIS转染试剂）。该比例经过大规模生产验证，可平衡转染效率与细胞毒性。若需调整，可在1:2-1:5范围内进行优化。
2.复合物制备流程
- 质粒稀释液体积占培养总体积5%（如100mL培养体系用5mL稀释液）。
- PolyTool™VIS转染试剂需直接加入稀释液，涡旋混匀后室温静置15分钟 。
- 禁止延长孵育时间（超过20分钟会导致复合物聚集）。
三、转染过程精细操作
1.培养条件设定
转染后维持37℃、5% CO2环境，摇床转速建议110 rpm。需避免剧烈震动导致复合物解离，同时确保氧气充分溶解。
2.时间控制节点
转染后72小时为最佳收获期，延迟收获可能导致细胞崩解污染病毒液。大规模生产时建议在生物反应器中实时监测溶氧和pH值。
四、质量控制与安全防护
1.质粒用量标准
每106细胞使用1μg总质粒（推荐浓度1μg/μL），多质粒共转染时需预先验证比例。
2.生物安全措施
病毒液收集需在Ⅱ级生物安全柜操作，使用0.45μm滤器除菌前应1000g离心10分钟去除细胞碎片。分装储存建议用无菌冻存管，-80℃保存避免反复冻融。
五、规模化生产特殊考量
1.培养体系扩展
该试剂支持30mL至1L培养体积，放大生产时需保持复合物体积占比5%。例如1L体系需50mL稀释液，对应2mg DNA和6mL试剂。
2.工艺稳定性验证
每批次生产需设置阳性对照（如GFP报告质粒），病毒滴度应>1×108 vg/mL。
